看板Biology
標 題Re: [問題] 請問PCR中cycle的數量與Taq用量是否有相關?
發信站KKCITY (Fri Apr 7 18:23:10 2006)
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※ 引述《jpegg ( 委內瑞拉雙劍尾)》之銘言：
> ※ 引述《roundball》之銘言：
> > 現在我想要嘗試到45個cycle,
> > 是否需要增高Taq用量呢?
> 我以前都是用0.75U 45 cycles
> 而且Taq並不是很貴的那種
> > 我查一下其他相關文獻,
> > 通常都是25~35個cycle,
> > 有文章指出若是PCR cycle數量太高,
> > 容易出現不專一性的增幅產物,
> > 有其他方法能在cycle維持在35個循環的前提下,
> > 讓條帶可以清晰呈現嗎?
> 或許可以把ANNEALING溫度提高一點點看看
> 其實還可以比較不同廠牌Taq（跟別人借借看） 不同Unit 不同cycle數
> 也許還可以寫在論文裡面
ㄟ.....原po不會是我學弟吧..........怎麼我愈過的問題你都有
rapd的幾個改善要點
1.跟taq沒有太大關聯 爛taq也做的出來 重點是rapd的r吧 ꘊ酑O高級taq可能會搞出跟便宜taq不同的結果
2.不是很建議cy數目再增加啦....會搞出很多不專一產物而且會越搞越亂
3.如果你確定那條band就是你要的..(難.....不然怎麼叫做RAPD可以把ANNEAL提高3度後
作TUOCH DOWN PCR(GRADENT)找個產物量跟專一性都可接受的溫度
4.跑電泳也要注意 理論上冰箱裡會跑的比室溫漂亮 TBE比TAE漂亮
ETBR低濃度震盪染色 流水退染
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