> ==> [email protected] (N￾N ) 的文章中提到: > 最近從cell上把RNA下來...也轉了cDNA > 然後有用一段primer當internal control去夾看看有沒有轉成功 > 發現是有的!! > 但卻可以發現跑完DNA膠後,照出的圖中,每一個well最上面 > 位置大約在load well的孔下面一點點皆有一條細細亮亮的band > 我學長說是chromosome,那這對cDNA後續要做的實驗會有影響嗎? 差太多了！ 經過萃取，只留RNA，去掉DNA，然後再去反轉錄成cDNA， 接著又去做PCR，怎還會有Chromosome？就是impurity罷了，哪會有 chromosome？ > 因為我的問題來了...就是後來我把cDNA去夾兩段片段..都沒東西 > 然後我又用gradient方式重找annealing溫度還是全沒有東西.. > 這時我想會部會我的cDNA..被分解了!!!..但這可能性因不高.. > 後來想會不會是PCR儀器有問題..我家是用PDA的PCR儀器.. > 聽說這種跑起來很差..請問有跑過的人,,,對這種儀器有哪些該注意的?? > 或到底好不好用?? > 到底需不需要找廠商來校正... > 謝謝 你有用internal primer和＿＿＿＿primer去夾擠，有產物，產物也符合 你的要求長度嗎？如果是的話，那麼PCR mechine就沒問題。如果不確定溫度的話， 直接由最低溫試起，不用Gradient了。 另外，PCR machine有沒問題？拿個實驗室最熟的DNA與Primers去試就好了， 如果這樣都做不出來～再去找廠商吧。 -- * Origin: 中山大學-美麗之島BBS * From: 61.223.183.233