作者zphiroude (凱凱)
看板Biology
標題[問題] 困惑的考古題
時間Tue Mar 9 22:51:00 2010
【問題】：
Cloning DNA 片段約2KB至pUC18 中，養在抗生素的plate中。
利用X-gal 篩選，得到藍白各一個菌落。
但是 在藍色菌落中的切割位只有發現約45 bp的片段 ， 而白色菌落中更是完全沒有外來
的片段！請解釋原因!!!
附上原題目：
http://ppt.cc/uk-c 第四題
【問題起因】：
中興大學98年生技所考古題....小弟是考生
【個人看法】：
小弟知道藍色＝beta-galactosidase水解X-gal ， DNA片段未插入。
白色＝DNA片段插入 ， 破壞了 Lac Z 。
但是題目....真的沒概念。請大大們幫忙解答。 感激不盡！！
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.62.183.98
1F：推 MoonMan0319:有可能是RE使用不當吧? 03/10 01:14
2F：→ zphiroude:限制脢使用不當嗎？可以幫忙解釋一下嗎？拜託了 03/10 09:06
3F：推 tsubasawolfy:題目完整敘述是啥..? 03/10 12:14
※ 編輯: zphiroude 來自: 61.62.183.98 (03/10 12:51)
4F：→ beowulfo:建議應該回答可能的原因.然後可以用甚麼方法來確認.. 03/10 16:33
5F：→ zphiroude:小弟就是不知道可能的原因，拜求大大幫忙 Orz 03/10 17:56
6F：→ turtle24:primer互黏變成45bp,codon無影響? vector互黏變白colony? 03/10 18:43
7F：→ turtle24:假設是用兩個切位送進去的話 pUC18不大 insert有2kb 03/10 18:45
8F：→ tsubasawolfy:兩個ori的plasmid不會replication 03/10 22:11
9F：→ tsubasawolfy:藍色大概就真的接進primer dimer 不過有切膠也不會這 03/10 22:12
10F：→ tsubasawolfy:蠢吧...白色沒target insert大概是塞入別段DNA 03/10 22:13
11F：→ tsubasawolfy:不對 題目是一丁點都沒有... 03/10 22:13
12F：→ zphiroude:primer ? transformation 沒用到primer吧＠＠ 03/11 09:01
13F：推 senlin:1)RE有star activity 無insert 但多切破壞LacZ 2)此載體 03/11 09:23
14F：→ senlin:未被多切 且插入的45bp片段未影響LacZ的ORF 所以仍呈藍色 03/11 09:25
15F：→ senlin:1)是指白色的菌落 2)是指藍色的菌落 03/11 09:25
16F：→ zphiroude:感謝樓上大大指點，但插入的45bp未影響lac Z的ORF， 03/11 10:12
17F：→ zphiroude:但pUC18 的切位應該是設計在ORF中，怎會無影響？？ 03/11 10:13
18F：→ senlin:接得好就變成雖外加15個胺基酸(=45bp) 但未影響酵素活性區 03/11 10:59
19F：→ senlin:（因未改變LacZ大部分的ORF序列） 03/11 11:02
20F：→ zphiroude:瞭解了，這樣就合理了。感謝senlin大大指導 03/11 11:21