※ 引述《kuogary1 (桂冠)》之銘言： : 標題: [問題] 請問基因圖譜如何定序 : 時間: Fri Jun 25 22:17:06 2010 : : : 【問題】：基因圖譜如何定序 : : : 【問題起因】：書上寫說，先把DNA解開，然後加入dATP, dGTP, dCTP, dTTP與引子 : : 接著再把它們混合後分到四個試管，四個試管分別加入ddATP, ddGTP, ddCTP, ddTTP : : 然後開始反應 : : 反應完成後跑電泳讀譜 : : 【個人看法】：可是DNA不是由互補的兩股組成嗎？ : 這樣直接把DNA解開去跑電泳，得到的結果怎麼有辦法代表DNA序列？ : 應該是要先把兩股分離開來吧？再挑一股來跑吧 : === : 先感恩各位大大的回答了^^ : -- : 飢餓是最好的調味 孤獨是最強的催眠 瘋狂找一雙唇 能夠當我酒杯 : : 早就對這一切厭倦 也曾憤怒喝下聖水 卻又無助醒在 下個漫長黑夜 : : -- :

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) : ◆ From: 112.104.158.145 : → turtle24:"引子"設計成只認其中一股 06/25 22:26 : 喔喔喔~暸解 : 那所以，如果像是一般細胞中DNA的複製 : 那個DNA複製就是有兩組RNA引子從兩頭進行嗎？ : 以及，如果這樣，那PCR中的引子，是不是都需要特別挑過... : 不是所有想放大的DNA都能使用？ : ※ 編輯: kuogary1 來自: 112.104.158.145 (06/25 22:32) in vivo的DNA replication從由特殊序列所構成的origin開始 通常在原核內origin只有一個 然後是bidirectional (因為是環狀DNA) 真核的話就相當多個 不然複製完都中秋節了 然後"基因圖譜"的定序方式通常是會先將DNA打碎之後ligate到固定序列的aptemer 或是linker上 在看要clone進vector裡面再進行sanger法定序或是直接上第二代定序機 aptamer跟linker的序列就是universal的primer序列 這些在一般遺傳學跟分生課本裡講的都很清楚可以自己參考看看 還有沒錯 幾乎每間實驗室都花不少錢在化學合成的primer上面 -- 人好 欠表 --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.165.225.252 ※ 編輯: Ianthegood 來自: 118.165.225.252 (06/25 23:40)