【問題】： 使用ELISA來檢測半抗原和抗體之親和常數以進行之後競爭法的實驗 【問題起因】： 實驗使用"化學方法修改過後的hapten和BSA結合"(稱之Hapten-BSA)先和抗體結合 再因原本的Hapten和抗體的親和常數較佳所以會將hapten-BSA趕走，以看到訊號改變 實驗儀器是以本身實驗室開發的系統且有做出結果 但為了更加確認，希望可以以成熟的ELISA實驗方法 求出Hapten和抗體之affinity constant。 Ps.這邊使用的hapten-BSA和製造抗體的抗原是不一樣的， 為了讓它和抗體的親和常數較差，還故意小小的修改Hapten的結構 【個人看法】： 因為小分子(我實驗的藥物分子量只有170)為半抗原，在ELISA的實驗上 ，間接法和三明治法都不合適，偵測方法大多為間接競爭法。 即Hapten-BSA先coating在盤子上，再加入固定濃度之抗體和不同濃度之Hapten， 而後加入二抗和基質後，便可得到OD值會隨Hapten濃度增加而下降 (因Hapten會先和抗體結合，剩下的抗體才會接盤子上的Hapten-BSA)。 我自己有閱讀其他有關ELISA的文獻，但我看到的都僅有Hapten-BSA和抗體親和常數算法 這方面我已經有足夠的文獻可以解答Hapten-BSA和抗體的Affinity constant。 但在Hapten和抗體求出affinty constant上卻苦無辦法。 Ps.我本身為化學系，這個問題也問過身邊可以問的生科系同學了， 但好像他們之中沒有人需要算這個，所以無法給我建議， 而我也去找了許多免疫學相關的書籍，但書都只給我親和常數的推論 並沒有給在間接競爭法上求小分子和抗體的親和常數公式 請可以幫忙解答的大大給我意見或參考文獻，我感激不盡。 【參考資料/連結】： 我有找到許多SPR同樣使用間接競爭法， 它可以同時求出Hapten-BSA和Hapten跟抗體的親和常數。 但是ELISA相關文獻僅有Hapten-BSA和抗體的親和常數計算讓我有點匪夷所思。 SPR文獻為:electrochimica Acta 1999 44 3849-3854 Elisa文獻為:Talanta 2005 66 1005-1011 --

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