作者linzijay (烏龜涵)
看板Biology
標題[問題] RT-PCR primer 不能用
時間Thu May 9 17:06:04 2013
【問題】
我設計了一對primer想用來偵測mRNA的量
片段位於Exon上，大小約75bps，
收到primer後有用genomic DNA做為template去跑PCR，
跑膠結果是Single band，且大小符合，
於是就用RT PCR後的cDNA做為template去跑PCR，
跑膠結果卻是2條band且都大於100bps，
有跑RNA膠也有跑-RT(有MMLV不加RNA)確認無DNA汙染
不知道為什麼會這樣？
(PCR藥品條件都一樣，elongation時間為10秒)
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.61.141
1F：推 qiet:你用的sample確定positive? primer設計有跨exon嗎? 05/09 22:27
2F：→ qiet:可上網用primer blast去確認你使用的primer是否有可能會P到 05/09 22:28
3F：→ qiet:其他不是你的target gene的cDNA 05/09 22:29
4F：推 NARCOS:恭喜妳拉!!!! 就是這個sample 不表現這個基因阿~! 05/22 07:00