我的實驗是做Wnt pathway 簡單的說～就是想辦法讓Wnt pathway on or off 目前為止～activate Wnt pathway都沒有問題 有問題的是inhibit 我使用的材料是dnTCF TCF是Wnt pathway下游的一個transcription repressor 這個construct是跟別的實驗室要的 問題來了 在test的時候就發現我的dnTCF不work 於是就做了transfection跑western看他protein有沒有表現 跟wild type比較的結果 western幾乎沒有表現～（意思就是wtTCF表現很多） 這當中老師懷疑是我transfection的問題 於是我co-transfect了GFP當作internal control 在照相的時候發現GFP的亮度有變 老師又懷疑是我照相的問題 於是我心一橫 又做了一次co-transfection with GFP 分別拿去跑flow和做IF 發現其實transfection efficiency都差不多 可是在wtTCF和dnTCF中 GFP的螢光減弱很多（無論是flow或是IF都是這樣的結果） 而在IF的結果中 dnTCF幾乎沒有表現 所以問題有幾個 1.到底為什麼我的dnTCF不會表現？？ 我要到的construct是delete掉N-terminal 93個amino acid 而我查paper一般用的dnTCF的construct是delete N-terminal 31或33個amino acid 但是我去查了TCF的 structure 即使delete掉前面93個amino acid應該是不會影響他的function才對 所以我一直不知道為什麼我的dnTCF不表現 2.在wtTCF中看到GFP的螢光被抑制是可以理解的 因為TCF是transcription repressor 重點就在於～這個現象在dnTCF裡面也有看到！ 如果dnTCF不會表現，它怎麼去影響GFP的expression？？ （我有做另一個control是transfect plasmid 的backbone但沒有任何gene 發現GFP的expression很亮～所以wtTCF和dnTCF相較之下變弱很多） 請版上高手幫忙解答吧 我已經搞這個搞了三個月 弄得很挫折 希望大家可以一起討論～ --

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