作者kakaman (日子過的真快阿)
看板Biotech
標題[求救] 2D
時間Mon Mar 10 14:45:39 2008
最近做2D
銀染完的gel變成一塊相當美麗的昆布
漂亮到想拿去熬湯...
整片gel跑出來的點很少 數一數大概六七個...
因為染不出點 所以染很久 所以marker黑道發亮...
想請問一下 這可能是哪裡出問題?
順帶一題 buffer都是現配的...
下面是配方:
1. Fix:50% methanol
25% acetic acid
2hr
2. 30% methanol for 15 min
3. ddH2O 5 min 3 times
4. 0.8mM Na2S2O3 for 2 min
5. ddH2O 5 min 3 times
6. silver:0.2% AgNO3 for 25 min
7. ddH2O 30 sec 2 times
8. Develop:0.28M Na2CO3
0.016mM Na2S2O3
0.0183% Formaldehyde
9. wash briefly
10. 0.042M Na2EDTA 10 min
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.92.59
1F：→ aggaci:昆布PAGE是因為醋酸沒洗乾淨的關係~~~想當初我也是ㄧ樣 03/10 14:49
2F：→ aggaci:很怕被別人看到...好丟臉.... 03/10 14:50
3F：→ aggaci:2D是個很難搞的實驗，原PO加油！ 03/10 14:51
4F：推 dankai:你清洗的步驟沒做好..就像一樓說的!!這步做好~~你的gel會很 03/10 18:01
5F：→ dankai:漂亮~~~~當初也是沒注意清洗的步驟~像昆布一樣!原本該有的 03/10 18:02
6F：→ dankai:點....因為背景太黑也看不到~~~ 03/10 18:02
7F：→ dankai:如果這個解決還沒有點....你萃取的方法可能有問題!要修改~ 03/10 18:03
8F：→ dankai:剛看到~~~"因為沒點所以染很久" 應該是一開始萃取就出問題~ 03/10 18:04
9F：→ dankai:染太久....膠一樣會過黑甚至你的蛋白質點會反白(銀)~~ 03/10 18:05
10F：推 canstrong:開始跑之前有沒有先定量？你跑多少蛋白呢? 03/10 22:39
11F：推 owlflying:如果培養基中糖份沒去除乾淨也是可能糊糊的樣子 03/11 17:12