※ 引述《Nox4156 (@@!)》之銘言： : 請教一下板友 : 最近跑RP-HPLC時發現平衡時間不太夠 想要確認一下多長的管柱需搭配多久的再平衡時間 : 因為我的層析方法是拉梯度的 怕下一個樣本進樣時管柱還沒平衡好 : 我的管柱體積是0.8 mL 再平衡時間是以10倍管柱體積計算 至少要整個管線皆流洗到 : 我朋友有跟我提到說WATERS以前教育訓練時有提到一個公式 可以估算需流洗的體積 : 各位板友有知道這個公式嗎?! : 另外，如果不同的管柱類型 (SEC、reverse-phase、normal-phase)再平衡的時間估算 : 會差不多嗎?! 感謝各位了 這三種管柱各有特性， 但是共同點是你的東西一定要全部出來了才能開始平衡， 否則會造成背景值的昇高甚至無法解釋的波峰。 此外平衡時的流速可以比工作時的流速快， 只要還在原廠的說明書允許範圍內， 這點可以節省時間， 但是要記得調回來就是。 normal phase: 一般狀況下用起始條件的溶液沖十倍體積是可接受的。 唯一的例外是當溶液裡有MeOH時， 管柱上還殘留一點點的MeOH， 有時就能造成你的產物分離時間明顯減短。 所以當有用到MeOH時， 不建議一開始就用起始條件， 而是用更非極性的條件先把管柱"歸零"， 然後再用起始條件。 就以0.8 mL的分析級管柱為例， 假如流洗比例是MeOH/DICHLOROMETHANE 5/95 -> 30/70， 我的平衡方法是先用純DICHLOROMETHANE沖五倍體積， 再用MeOH/DICHLOROMETHANE 5/95 沖十倍體積。 reverse phase: reverse phase很少遇到平衡上的問題， 只要沒有亂來往裡面打入不該打的有機溶液或是讓空氣跑進去的話。 SEC: SEC很麻煩， 它的流速不能快， 溶液對材質口徑大小影響很大; 所以平衡時間是以"夜"算， 而且必須是梯度式，慢慢的改變。 抓SEC條件是場惡夢， 特別是當有人在等你的報告時…… 它不是那種"我今晚加班"就可以快速解決的玩意， 必須小心，而且早點動手。 --

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