※ 引述《[email protected] (raiken)》之銘言： > ※ 引述《[email protected] ()》之銘言： > : 小弟我利用E. coli表現含His tag的蛋白質, > : 經過破菌及離心後發現, > : 我的蛋白質在inclusion body裡面, > : 我有用8 M urea去溶inclusion body, > : 但是還是renature不回來, > : 透析後,還是會沈澱！ > : 所以想要請問一下大大, > : 能否更改誘導及培養條件,讓inclusion body的情況改善? > 如果只改變induction條件的話,一般就是測37度3小時或20度20小時 > 再不然就是在放大完後,先冰一下做cold shake再去induction ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ 這個方式還真的是第一次聽到耶.. > 或許有機會可以改善 基本上會變成inclusion body主要的原因 好像是因為重組蛋白質可能對細菌本身有害 可以試著不要讓它表現量那麼高就有可能可以改善inclusion body的情形 試試看把inducer的量降低 或者培育的溫度降低 時間夠多的話就換一下vector pET system裡面有一些vector帶有signal peptide 可以把蛋白質分泌到paripalsmic space 這樣有機會可以解決inclusion body的問題 不過還是要看蛋白質啦 不見得每種蛋白質都可以分泌出去的 -- ┌─────◆ＫＫＣＩＴＹ◆─────┐ ◢╱ 只要你通過身份認證 ~ ◥█ │ bbs.kkcity.com.tw │ █▉─ 免經驗、五人連署即開班系板 ◥ └──《From:220.137.58.189 》──┘ ◥╲ 趕快為班上設個秘密基地吧! ◢ --