※ 引述《[email protected] (raiken)》之铭言： > ※ 引述《[email protected] ()》之铭言： > : 小弟我利用E. coli表现含His tag的蛋白质, > : 经过破菌及离心後发现, > : 我的蛋白质在inclusion body里面, > : 我有用8 M urea去溶inclusion body, > : 但是还是renature不回来, > : 透析後,还是会沈淀！ > : 所以想要请问一下大大, > : 能否更改诱导及培养条件,让inclusion body的情况改善? > 如果只改变induction条件的话,一般就是测37度3小时或20度20小时 > 再不然就是在放大完後,先冰一下做cold shake再去induction ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ 这个方式还真的是第一次听到耶.. > 或许有机会可以改善 基本上会变成inclusion body主要的原因 好像是因为重组蛋白质可能对细菌本身有害 可以试着不要让它表现量那麽高就有可能可以改善inclusion body的情形 试试看把inducer的量降低 或者培育的温度降低 时间够多的话就换一下vector pET system里面有一些vector带有signal peptide 可以把蛋白质分泌到paripalsmic space 这样有机会可以解决inclusion body的问题 不过还是要看蛋白质啦 不见得每种蛋白质都可以分泌出去的 -- ┌─────◆ＫＫＣＩＴＹ◆─────┐ ◢╱ 只要你通过身份认证 ~ ◥█ │ bbs.kkcity.com.tw │ █▉─ 免经验、五人连署即开班系板 ◥ └──《From:220.137.58.189 》──┘ ◥╲ 赶快为班上设个秘密基地吧! ◢ --