> ==> [email protected] () 的文章中提到: > ※ 引述《[email protected] (shan)》之銘言： > > 想請教各位好心人們 > > 關於 RT-PCR 的一個問題 > > 一般而言進行 RT-PCR 會先轉 RT 後再 PCR RT-PCR是一個步驟，不是拆開的兩個步驟。 它用RTase做為polymerase，RNA作為template， 產物就是cDNA (complementary DNA)，primer約有四個選擇 1. designed primers 2. oligo d(T) primer 3. random primers 4. RNA degraded primer。 市售的kit就是讓你做到first strand cDNA，接下來要如何應用 cDNA就是你的事了。 請自行思索一下，那麼你接下來的問題就有答案了。 > > 所以會用兩種 primer > > 那如果是 RT 和 PCR 同時進行(因為他是一套全程的 kit) > > 可以只用上述的 PCR 專用的 primer 來作全程的實驗嗎? > 你一開始說的RT-PCR是把mRNA轉cDNA > 再把cDNA拿去做複製叫做Reverse transcription 再PCR no.... > 你後述的RT-PCR是指real-time PCR no.... > 可以用來偵測各種不同組織的mRNA的量 > Primer也是用PCR的primer > 只是還要再多加一些螢光物 no always. > 螢光物的卡在DNA上的位置都不同 > 依螢光物的種類而定 > 每種都有人在用 > 大概是這樣子，如果有高手要補充或是糾正的 > 麻煩一下囉^_^ protocol text book例如molecular cloning之類的書是需要的， 如果你想知道原理的話。 paper除非是技術原創者，它不會細說原理。 而text book，如Gene講述的多為研究成果的歸納，也不會有技術的細部解說。 另外不花功夫，以「猜」來湊答案是小學生在做的事，多看書沒壞處， 別望文生義胡亂猜，那對研究沒半點好處。 -- * Origin: 中山大學-美麗之島BBS * From: 61.223.71.129