> ==> [email protected] () 的文章中提到: > ※ 引述《[email protected] (shan)》之铭言： > > 想请教各位好心人们 > > 关於 RT-PCR 的一个问题 > > 一般而言进行 RT-PCR 会先转 RT 後再 PCR RT-PCR是一个步骤，不是拆开的两个步骤。 它用RTase做为polymerase，RNA作为template， 产物就是cDNA (complementary DNA)，primer约有四个选择 1. designed primers 2. oligo d(T) primer 3. random primers 4. RNA degraded primer。 市售的kit就是让你做到first strand cDNA，接下来要如何应用 cDNA就是你的事了。 请自行思索一下，那麽你接下来的问题就有答案了。 > > 所以会用两种 primer > > 那如果是 RT 和 PCR 同时进行(因为他是一套全程的 kit) > > 可以只用上述的 PCR 专用的 primer 来作全程的实验吗? > 你一开始说的RT-PCR是把mRNA转cDNA > 再把cDNA拿去做复制叫做Reverse transcription 再PCR no.... > 你後述的RT-PCR是指real-time PCR no.... > 可以用来侦测各种不同组织的mRNA的量 > Primer也是用PCR的primer > 只是还要再多加一些萤光物 no always. > 萤光物的卡在DNA上的位置都不同 > 依萤光物的种类而定 > 每种都有人在用 > 大概是这样子，如果有高手要补充或是纠正的 > 麻烦一下罗^_^ protocol text book例如molecular cloning之类的书是需要的， 如果你想知道原理的话。 paper除非是技术原创者，它不会细说原理。 而text book，如Gene讲述的多为研究成果的归纳，也不会有技术的细部解说。 另外不花功夫，以「猜」来凑答案是小学生在做的事，多看书没坏处， 别望文生义胡乱猜，那对研究没半点好处。 -- * Origin: 中山大学-美丽之岛BBS * From: 61.223.71.129