※ 引述《a64toto (我)》之銘言： : ※ [本文轉錄自 Biology 看板] : 作者: a64toto (我) 看板: Biology : 標題: [問題] 再請問一下ligation的問題 : 時間: Sat Apr 29 20:24:52 2006 : 之前在版上有看過一些相關的問題 : 可是還是有一些疑問想請教一下 : 我是使用Q牌的agarose gel extraction kit : 在使用前與使用後都有跑agarose確認有band出來 : 可是在transform都沒有coloy長出來(接到pET 23a vector) : 可是接到T vector的都有長出blue colony 藍白斑篩選,藍色是空載體,白色才是有插入片斷的 : 所以應該不是transform出問題囉 : 那要check ligation有沒有問題的話 : 好像positive control是放已經切好的vector是嗎?這樣一定會長出colony嗎? : 還是我搞錯啦 : 還有如果拿10 ul的ligation mixture(已經16度O/N)直接跑agarose gel : 這樣能看得出來有沒有接起來嗎? 看不出來的 連接效率很低的,所以連上的環狀質粒不可能看到 : 最後我染agarose gel的dye是SYBR不是EtBR,請問這樣會對ligation有影響嗎? 和你一樣的問題我也遇到過 後來改了一些條件就做出來了 一是，pET系列載體都是低拷貝的，得到的vector通常濃度較低，連接時要稍多加一些 二是，同樣是由于低拷貝的原因，培養基（無論固體還是液體）裡的抗生素要比平時減半 三是，在連pET系列載體時，T牌的ligase通常會比N牌的差蠻多 --

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