作者aggaci (有氣質的台客)
看板Biotech
標題Re: 請問關於EMSA的問題
時間Fri May 26 01:05:35 2006
※ 引述《aggaci (有氣質的台客)》之銘言：
之前EMSA都用DIG做的
後來因為一些問題改用isotope試試看
結果有加nuclear extract的有shift出現
但是後來以100x沒有label的、同樣的DNA去競爭(和probe一起反應)
竟然沒辦法競爭掉?
我加的nuclear extract有20 micro-gram
DNA(garma-p32 labeled) 加 8 fmol
30度 incubation 30 min
好奇怪，有EMSA達人可以告訴我為什麼會這樣嗎?
我覺得很不合理
看paper 50x都可以競爭掉了，竟然100X不行?!
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◆ From: 140.114.100.165
※ 編輯: aggaci 來自: 140.114.100.165 (05/24 19:15)
1F：推 apa9394:請問阿家西大大~你們DIG KIT是哪家的阿~ 05/25 17:45
2F：推 aggaci:ROCHE阿~~ 05/25 21:01
3F：推 erised:你有先把cold probe跟nuclear extracts先prebind嗎? 05/25 23:58
4F：→ erised:我都是在室溫先prebind 30mins再加入hot probe室溫20-30min 05/25 23:58
5F：推 ZecAhau:我是把 competitor 先跟 protein pre-bind 37度 10分鐘 05/26 00:09
請問你(妳)們pre-binding時cold probe都是labeled probe的幾倍?
有無做過neagative control呢?
之前一直做不出來 火大了，pre-binding給他來個200倍
結果是什麼都競爭掉了，連neagative control都競爭掉了(一定不會binding的那組)
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