作者aggaci (有气质的台客)
看板Biotech
标题Re: 请问关於EMSA的问题
时间Fri May 26 01:05:35 2006
※ 引述《aggaci (有气质的台客)》之铭言：
之前EMSA都用DIG做的
後来因为一些问题改用isotope试试看
结果有加nuclear extract的有shift出现
但是後来以100x没有label的、同样的DNA去竞争(和probe一起反应)
竟然没办法竞争掉?
我加的nuclear extract有20 micro-gram
DNA(garma-p32 labeled) 加 8 fmol
30度 incubation 30 min
好奇怪，有EMSA达人可以告诉我为什麽会这样吗?
我觉得很不合理
看paper 50x都可以竞争掉了，竟然100X不行?!
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◆ From: 140.114.100.165
※ 编辑: aggaci 来自: 140.114.100.165 (05/24 19:15)
1F：推 apa9394:请问阿家西大大~你们DIG KIT是哪家的阿~ 05/25 17:45
2F：推 aggaci:ROCHE阿~~ 05/25 21:01
3F：推 erised:你有先把cold probe跟nuclear extracts先prebind吗? 05/25 23:58
4F：→ erised:我都是在室温先prebind 30mins再加入hot probe室温20-30min 05/25 23:58
5F：推 ZecAhau:我是把 competitor 先跟 protein pre-bind 37度 10分钟 05/26 00:09
请问你(你)们pre-binding时cold probe都是labeled probe的几倍?
有无做过neagative control呢?
之前一直做不出来 火大了，pre-binding给他来个200倍
结果是什麽都竞争掉了，连neagative control都竞争掉了(一定不会binding的那组)
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