※ 引述《indie (band of brothers)》之銘言： : ※ 引述《aggaci (有氣質的台客)》之銘言： : : 再請問您一下 : : 請問您的mixture要loading時，有加dye嗎? : : 因為我不只在一個地方看到不加dye loading : : 於另一個well只加dye以便看跑到什麼地方... : : 為什麼呢? : 我最近跑的感覺是加了dye以後 : protein會沉澱 並且卡在well裡面 (可以看到明顯的particle) : 所以有在考慮不加dye loading : 可是我很懷疑 不加dye loading : DNA會不會沉不下去? : 我用的是polyacrylamide 的膠 (直立式電泳槽) : 不知道有沒有先進有load過不加dye的DNA呢?? : 可以跑嗎? 歐! 這個我這幾天有做 的確，在well裡的抗數比之前少許多 可以沉下去啦，安啦 指不過有個風險是很怕load錯，畢竟沒顏色 不過今天跑出個奇怪的DATA 昨天重新label我的probe 想說來測試看看 過gil filtration後，抗數超強(超過2000抗) binding完要loading前，每一管抗數大概300抗 結果跑了5%的PAGE(含0.5x TBE)後，free probe怎麼只有10抗??! (第二個DYE沒跳海阿) 真是怪了，難道說label的效率極差媽???!! 以下是我 label的步驟 double strand DNA (sticked end，5端各突出4個T) 1.5 ul(final 1 pmol) 10x buffer 3 ul klenow enzyme(NEB) 1.5 ul p32-ATP 3.75 ul water 18.75 ul total 30 ul 37度作用2小時再過gel filtration column. 真是怪了............囧oz -- http://0rz.net/da0PG 我的相簿.... --

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