※ 引述《indie (band of brothers)》之铭言： : ※ 引述《aggaci (有气质的台客)》之铭言： : : 再请问您一下 : : 请问您的mixture要loading时，有加dye吗? : : 因为我不只在一个地方看到不加dye loading : : 於另一个well只加dye以便看跑到什麽地方... : : 为什麽呢? : 我最近跑的感觉是加了dye以後 : protein会沉淀 并且卡在well里面 (可以看到明显的particle) : 所以有在考虑不加dye loading : 可是我很怀疑 不加dye loading : DNA会不会沉不下去? : 我用的是polyacrylamide 的胶 (直立式电泳槽) : 不知道有没有先进有load过不加dye的DNA呢?? : 可以跑吗? 欧! 这个我这几天有做 的确，在well里的抗数比之前少许多 可以沉下去啦，安啦 指不过有个风险是很怕load错，毕竟没颜色 不过今天跑出个奇怪的DATA 昨天重新label我的probe 想说来测试看看 过gil filtration後，抗数超强(超过2000抗) binding完要loading前，每一管抗数大概300抗 结果跑了5%的PAGE(含0.5x TBE)後，free probe怎麽只有10抗??! (第二个DYE没跳海阿) 真是怪了，难道说label的效率极差妈???!! 以下是我 label的步骤 double strand DNA (sticked end，5端各突出4个T) 1.5 ul(final 1 pmol) 10x buffer 3 ul klenow enzyme(NEB) 1.5 ul p32-ATP 3.75 ul water 18.75 ul total 30 ul 37度作用2小时再过gel filtration column. 真是怪了............囧oz -- http://0rz.net/da0PG 我的相簿.... --

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