作者wensing (潛力股)
看板Biotech
標題[問題] 請教各位先進E. coli表現與 SDS-page的問題！
時間Wed Jun 21 11:27:26 2006
各位先進，小弟初次接觸用E. coli表現蛋白！
我採用的是M15[pREP4]與pQE1，37℃，150rpm，1mMIPTG(最終)
我的蛋白質是20KDa
現在我是將誘導後(4hr)的菌液，取 100μL 離心 去上清液
直接再加入sample buffer (β-me)(有加熱處理)，然後直接跑SDS電泳。
可是在電泳圖上看不到我的產物位置 (我有對照組)
但我有觀察well到上有一層薄薄的白色沉澱物
我想問：
1. 那一層白色的東西是什麼？ 會是我的產物(都變成inclusion body)嗎？
2. inclusion body 加入sample buffer處理後直接跑膠片
這樣子會看到得band嗎？也就是sds可完全部破壞inclusion body？
3. M15[pREP4]與質體pQE1均會產生抑制子，1mM IPTG這樣子濃度夠嗎？
還是太多？(我是照著手冊上培養方式)。
4. 若萬一都是inclusion body，是否我要改變培養溫度(低溫培養)會比較好？
煩請各位先進指點一下！
謝謝！
--
wensing (ptt) = eular (kkcity)
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.23.212
1F：推 kirry:妳離心的轉速和時間是多久 06/22 00:32
2F：→ kirry:4.改變誘導溫度和降低IPTG試試看 06/22 00:33
3F：推 virustt:1因該不是 2會 3夠 4看運氣 06/23 20:50
4F：推 virustt:會沒表現在確定plasmid有insert下 還沒有大量表現的話.. 06/23 20:52
5F：→ virustt:請確定你是用對expression host 06/23 20:53