作者wensing (潜力股)
看板Biotech
标题[问题] 请教各位先进E. coli表现与 SDS-page的问题！
时间Wed Jun 21 11:27:26 2006
各位先进，小弟初次接触用E. coli表现蛋白！
我采用的是M15[pREP4]与pQE1，37℃，150rpm，1mMIPTG(最终)
我的蛋白质是20KDa
现在我是将诱导後(4hr)的菌液，取 100μL 离心 去上清液
直接再加入sample buffer (β-me)(有加热处理)，然後直接跑SDS电泳。
可是在电泳图上看不到我的产物位置 (我有对照组)
但我有观察well到上有一层薄薄的白色沉淀物
我想问：
1. 那一层白色的东西是什麽？ 会是我的产物(都变成inclusion body)吗？
2. inclusion body 加入sample buffer处理後直接跑胶片
这样子会看到得band吗？也就是sds可完全部破坏inclusion body？
3. M15[pREP4]与质体pQE1均会产生抑制子，1mM IPTG这样子浓度够吗？
还是太多？(我是照着手册上培养方式)。
4. 若万一都是inclusion body，是否我要改变培养温度(低温培养)会比较好？
烦请各位先进指点一下！
谢谢！
--
wensing (ptt) = eular (kkcity)
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.23.212
1F：推 kirry:你离心的转速和时间是多久 06/22 00:32
2F：→ kirry:4.改变诱导温度和降低IPTG试试看 06/22 00:33
3F：推 virustt:1因该不是 2会 3够 4看运气 06/23 20:50
4F：推 virustt:会没表现在确定plasmid有insert下 还没有大量表现的话.. 06/23 20:52
5F：→ virustt:请确定你是用对expression host 06/23 20:53