作者ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)
看板Biotech
標題Re: 請問怎麼把蛋白質從PAGE上elute出來?
時間Wed Jun 28 22:16:15 2006
※ 引述《aggaci (有氣質的台客)》之銘言：
: 歹勢
: 我講一下實驗流程好了
: 我有一段oligonucleotide 其中5端lebel FITC
: 拿去做EMSA
: 我預期可以看的到shift(isotope有，paper也有人這麼做)
: 再把shift挖下來跑sds-PAGE 將裡面的蛋白質分開
: 以方便做western blot或是MS/MS分析
那就把EMSA以後的PAGE有訊號的地方挖下來
然後用液態氮磨碎，當然之後要放一點DNase
(畢竟用isotope label的東西還是月少接觸其它東西越好)
接著去跑SDS-PAGE
(做到這邊就可以拿去做protein identity了,反正denature form也沒差)
之後的步驟就用樓上討論的
在mupidⅡ tank裡面用透析膜包著，透析以後用centircon濃縮
這樣應該夠讓你做後面的western
(除非你的是mono-Ab，會認native form某domain，不然上述作法應該可行)
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以上只是我的想法，歡迎大家討論:D
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我們學姐做的比你麻煩"一點點"，是拿全菌的lysate做硫銨割成5等分以後透析
然後各fraction拿去上gel filtration
再把有偵測到蛋白peak的fraction拿來對已知序列的片段做EMSA..
接著就像你上面要搞的這樣XDDD
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