作者ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)
看板Biotech
标题Re: 请问怎麽把蛋白质从PAGE上elute出来?
时间Wed Jun 28 22:16:15 2006
※ 引述《aggaci (有气质的台客)》之铭言：
: 歹势
: 我讲一下实验流程好了
: 我有一段oligonucleotide 其中5端lebel FITC
: 拿去做EMSA
: 我预期可以看的到shift(isotope有，paper也有人这麽做)
: 再把shift挖下来跑sds-PAGE 将里面的蛋白质分开
: 以方便做western blot或是MS/MS分析
那就把EMSA以後的PAGE有讯号的地方挖下来
然後用液态氮磨碎，当然之後要放一点DNase
(毕竟用isotope label的东西还是月少接触其它东西越好)
接着去跑SDS-PAGE
(做到这边就可以拿去做protein identity了,反正denature form也没差)
之後的步骤就用楼上讨论的
在mupidⅡ tank里面用透析膜包着，透析以後用centircon浓缩
这样应该够让你做後面的western
(除非你的是mono-Ab，会认native form某domain，不然上述作法应该可行)
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以上只是我的想法，欢迎大家讨论:D
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我们学姐做的比你麻烦"一点点"，是拿全菌的lysate做硫铵割成5等分以後透析
然後各fraction拿去上gel filtration
再把有侦测到蛋白peak的fraction拿来对已知序列的片段做EMSA..
接着就像你上面要搞的这样XDDD
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