※ 引述《[email protected] (realm)》之銘言： : 這是我第一次做蛋白質表現... : 我的是帶有his-tag的蛋白質...於E. coli中表現... : 用Ni-NTA進行純化... : 目前的問題是...我懷疑是因為表現量太高...所以我的蛋白在pellet的部分... : 就我所知, 透過調整培養條件等等...可以將pellet的蛋白變成在supernatant中... : 我之前的條件...37度, 0.5 mM IPTG, 6小時 : 我在想...將溫度改成30度...減少IPTG的量...不過不知道該減少到多少... : induction的時間是否需要調整... : 因此想請教有相關經驗的大大~~能否提供一些經驗分享~~ : ...另外想問我的觀念是否正確... : 之所以可以將pellet中的蛋白變到supernatant中... : 主要是因為透過培養條件的調整, 使蛋白的表現量下降... : 這樣的觀念對嗎?? : 先謝過~~:) 說表現量太高也不完全錯 可以說是 短時間內 蛋白質表現量過大 形成inclusion Body 降低溫度 也是一個手段 可以用30 25 20度去試試看 但是形成inclusion Body 不一定只是溫度太高的問題 第一個比較糟糕的可能是 你的蛋白質序列可能有突變 而無法的形成正常結構 導致是以peptide形式出來 如果量又多 容易形成Inclusion Body 如果你用低溫（20度）induction 還是一樣的話 就要小心了 第二個 比較樂觀的可能是 你用的菌株 如果是BL21 因為他細胞質環境處於還原狀態（E.coli都是） 所以雙硫鍵無法形成 容易使出來的protein處在peptide形式 可以用origami (<-不知有沒有拼對) 這個E.coli不會破壞雙硫鍵 但表現量感覺比BL21差（這只是感覺我沒做比較） 基本上induction的條件要慢慢去抓 當然如果之前有人純化過這種蛋白 有條件的話 會比較輕鬆 祝好運～～ -- 如果活在世上只是扮演著大家所期望的自己 那扮演好了又怎樣 不如靜靜的讓自己消失吧 總是多餘的存在只是種荒謬的錯誤 --

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