※ 引述《[email protected] (realm)》之铭言： : 这是我第一次做蛋白质表现... : 我的是带有his-tag的蛋白质...於E. coli中表现... : 用Ni-NTA进行纯化... : 目前的问题是...我怀疑是因为表现量太高...所以我的蛋白在pellet的部分... : 就我所知, 透过调整培养条件等等...可以将pellet的蛋白变成在supernatant中... : 我之前的条件...37度, 0.5 mM IPTG, 6小时 : 我在想...将温度改成30度...减少IPTG的量...不过不知道该减少到多少... : induction的时间是否需要调整... : 因此想请教有相关经验的大大~~能否提供一些经验分享~~ : ...另外想问我的观念是否正确... : 之所以可以将pellet中的蛋白变到supernatant中... : 主要是因为透过培养条件的调整, 使蛋白的表现量下降... : 这样的观念对吗?? : 先谢过~~:) 说表现量太高也不完全错 可以说是 短时间内 蛋白质表现量过大 形成inclusion Body 降低温度 也是一个手段 可以用30 25 20度去试试看 但是形成inclusion Body 不一定只是温度太高的问题 第一个比较糟糕的可能是 你的蛋白质序列可能有突变 而无法的形成正常结构 导致是以peptide形式出来 如果量又多 容易形成Inclusion Body 如果你用低温（20度）induction 还是一样的话 就要小心了 第二个 比较乐观的可能是 你用的菌株 如果是BL21 因为他细胞质环境处於还原状态（E.coli都是） 所以双硫键无法形成 容易使出来的protein处在peptide形式 可以用origami (<-不知有没有拼对) 这个E.coli不会破坏双硫键 但表现量感觉比BL21差（这只是感觉我没做比较） 基本上induction的条件要慢慢去抓 当然如果之前有人纯化过这种蛋白 有条件的话 会比较轻松 祝好运～～ -- 如果活在世上只是扮演着大家所期望的自己 那扮演好了又怎样 不如静静的让自己消失吧 总是多余的存在只是种荒谬的错误 --

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