※ 引述《jsi (jsi)》之銘言： : ※ 引述《CD3 (tot)》之銘言： : : 這次還是老樣子 culture到第三代的時候 : : 細胞又開始死亡 : : 前天看到的細胞還蠻健康的 突然間數目就遽減 : : 我真的覺得好挫折 希望有類似經驗的人能夠提供一些意見給我 : : 謝謝!! : 不知道你說的medium和PBS沒問題是如何測試的 : 我想你可以請學長幫你配一罐medium及PBS來養養看 : 把你配的medium及PBS拿給學長養養看 檢測是否問題出於此 : btw,你應該是用RPMI泡medium吧? 這個方法學長已經試過了 所以現在我在culture Jurkat的時候 我的RPMI都是和學長拿的 但是DPBS是我自己配的 不過DPBS用到現在 也快一學期了 我是有懷疑過DPBS 但是一直養到第三代才出事 似乎也不太合理 : 此外你提到曾經將細胞穩定培養一個月 那差不多可繼代十代 : 是否這個月跟其他時候培養上有任何差異? : 繼代時有無使用過火過的玻璃PIPET 是否因為過火太久導致溫度過高使細胞死亡? : 繼代打散細胞時是否有打出很多泡泡? 太多泡泡對細胞而言並非好事 : flask放到incubator中有無旋開蓋子? : 大約多久繼代一次? 是否放太久是細胞不健康? 我是用plate養細胞 一次大概放2乘10的六次吧 medium則是放10ml左右 每兩天culture一次 養最長的那一次 剛好是學長要出國 所以先將Medium分給我 我就按照之前的步驟來養 也沒有什麼和之前不一樣的地方 : 我想繼代jurkat時應該是不會用到trypsin 所以可能不是這方面的問題 : 不過還是順帶一提 配置trypsin時需用等張溶液稀釋 而不是用水 : 若用水稀釋之trypsin來處理細胞 則細胞會長得很不好 : 我在培養JURKAT CELL時 通常都養在細胞數很少的狀況下 : 而我老闆則喜歡養在細胞數很多的狀況下 細胞都長得不錯 : 所以你可以每天觀察細胞數 是細胞因為死亡減少了 或者細胞只是長得比較慢? : 不知道你是否還有培養其他細胞? 觀察到的細胞大多已經是破裂的細胞 我曾經將那些細胞重新resuspend再養一次 雖然細胞有再養起來 但是學長說那些型態已經有些改變了 我自己倒是覺得還好啦 也許我該用flow來看看細胞是不是真的已經有所改變呢? 真的很謝謝你! --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.112.41.67