※ 引述《jsi (jsi)》之铭言： : ※ 引述《CD3 (tot)》之铭言： : : 这次还是老样子 culture到第三代的时候 : : 细胞又开始死亡 : : 前天看到的细胞还蛮健康的 突然间数目就遽减 : : 我真的觉得好挫折 希望有类似经验的人能够提供一些意见给我 : : 谢谢!! : 不知道你说的medium和PBS没问题是如何测试的 : 我想你可以请学长帮你配一罐medium及PBS来养养看 : 把你配的medium及PBS拿给学长养养看 检测是否问题出於此 : btw,你应该是用RPMI泡medium吧? 这个方法学长已经试过了 所以现在我在culture Jurkat的时候 我的RPMI都是和学长拿的 但是DPBS是我自己配的 不过DPBS用到现在 也快一学期了 我是有怀疑过DPBS 但是一直养到第三代才出事 似乎也不太合理 : 此外你提到曾经将细胞稳定培养一个月 那差不多可继代十代 : 是否这个月跟其他时候培养上有任何差异? : 继代时有无使用过火过的玻璃PIPET 是否因为过火太久导致温度过高使细胞死亡? : 继代打散细胞时是否有打出很多泡泡? 太多泡泡对细胞而言并非好事 : flask放到incubator中有无旋开盖子? : 大约多久继代一次? 是否放太久是细胞不健康? 我是用plate养细胞 一次大概放2乘10的六次吧 medium则是放10ml左右 每两天culture一次 养最长的那一次 刚好是学长要出国 所以先将Medium分给我 我就按照之前的步骤来养 也没有什麽和之前不一样的地方 : 我想继代jurkat时应该是不会用到trypsin 所以可能不是这方面的问题 : 不过还是顺带一提 配置trypsin时需用等张溶液稀释 而不是用水 : 若用水稀释之trypsin来处理细胞 则细胞会长得很不好 : 我在培养JURKAT CELL时 通常都养在细胞数很少的状况下 : 而我老板则喜欢养在细胞数很多的状况下 细胞都长得不错 : 所以你可以每天观察细胞数 是细胞因为死亡减少了 或者细胞只是长得比较慢? : 不知道你是否还有培养其他细胞? 观察到的细胞大多已经是破裂的细胞 我曾经将那些细胞重新resuspend再养一次 虽然细胞有再养起来 但是学长说那些型态已经有些改变了 我自己倒是觉得还好啦 也许我该用flow来看看细胞是不是真的已经有所改变呢? 真的很谢谢你! --

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