※ 引述《goddogic (狗狗)》之銘言： : 我是抽RNA-->RT--> cDNA-> PCR : 第一次很亮 : 但是拿同樣的cDNA同樣PCR條件: 第二次PCR亮度減為1/10 : 第3次減為1/100 : 第4次就看不到了 : ============================================== : 換不同對引子,相同cDNA,不同PCR條件 : PCR第一次很亮,第二次PCR亮度減為1/10 : 第3次減為1/100 : 第4次就看不到了 : ============================================== : 加enhancer : 5% glycerol ==> 結果反而沒有band : 還是原本只加5% DMSO 有band : 但是:相同cDNA相同PCR條件 : PCR第一次很亮,第二次PCR亮度減為1/10 : 第3次減為1/100 : 第4次就看不到了 : ============================================= : 我們把cDNA存在-20度C 應該不會degrade阿 : 拜託大家幫忙 ><" : 我覺得這件事情很有趣 : 可是不解決我的實驗做不出來 我DNA都存在-40度喔 不過如果你們實驗室沒有這樣的冷凍櫃就沒辦法了 只能說 趕快用掉吧 至於你的PCR.. 你沒說你不同條件是哪裡不同耶? 通常越亮表示產物越多 產物越多 表示鏈合反應條件比較不嚴苛 (通常是溫度比較低) 或是cycle數比較多 如果同樣條件 作不同重複 而有你所說的那個情形 很有可能是DNA degrad了 不管怎樣 你最好先做個小實驗 一部分一部分確定 看是哪個環節有問題 就是所有條件都固定 只有一個變因 慢慢試 --

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