※ 引述《goddogic (狗狗)》之铭言： : 我是抽RNA-->RT--> cDNA-> PCR : 第一次很亮 : 但是拿同样的cDNA同样PCR条件: 第二次PCR亮度减为1/10 : 第3次减为1/100 : 第4次就看不到了 : ============================================== : 换不同对引子,相同cDNA,不同PCR条件 : PCR第一次很亮,第二次PCR亮度减为1/10 : 第3次减为1/100 : 第4次就看不到了 : ============================================== : 加enhancer : 5% glycerol ==> 结果反而没有band : 还是原本只加5% DMSO 有band : 但是:相同cDNA相同PCR条件 : PCR第一次很亮,第二次PCR亮度减为1/10 : 第3次减为1/100 : 第4次就看不到了 : ============================================= : 我们把cDNA存在-20度C 应该不会degrade阿 : 拜托大家帮忙 ><" : 我觉得这件事情很有趣 : 可是不解决我的实验做不出来 我DNA都存在-40度喔 不过如果你们实验室没有这样的冷冻柜就没办法了 只能说 赶快用掉吧 至於你的PCR.. 你没说你不同条件是哪里不同耶? 通常越亮表示产物越多 产物越多 表示链合反应条件比较不严苛 (通常是温度比较低) 或是cycle数比较多 如果同样条件 作不同重复 而有你所说的那个情形 很有可能是DNA degrad了 不管怎样 你最好先做个小实验 一部分一部分确定 看是哪个环节有问题 就是所有条件都固定 只有一个变因 慢慢试 --

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