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標 題[請問] double restriction enzyme digest
發信站新綠園 (Tue Jul 25 16:32:28 2006)
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我是小小實習生
欲想將 PBI121(13Kb) 用BamH1和Sac1切兩刀(應該會得到12Kb和約2Kb的GUS片段)
但是一連切了不下十次...
得到的結果都是明顯可見2K的GUS片段，但是我要的12KbVector呈現短短的smear
smear現象肉眼判斷是從原本的13Kb到我要的12Kb停止
是否
1.其中之一酵素失活(但又可以看到GUS片段??)
2.plamid問題，是否純化過程中殘留過多的RNA或雜質影響
3.condition: H2O 6
10XBSA 2
buffer1 2 (BamH175% Sac1100%)
DNA 8
enzyme BamH1 1
Sac1 1 (ul)
37度 water bath 3 hours
請達人們幫我看看哪裡出了問題
感恩
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1F：推 ebiyaya:這可能要看圖才知道 我印象中BamH1和Sac1是不推薦一起切的 07/26 00:31
2F：→ ebiyaya:smear的現象是否是因為DNA量太多造成拖尾巴的現象 07/26 00:33
3F：推 ebiyaya:NEB buffer中 BamH1和Sac1是推薦分開切效率較好 07/26 00:36