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标 题[请问] double restriction enzyme digest
发信站新绿园 (Tue Jul 25 16:32:28 2006)
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我是小小实习生
欲想将 PBI121(13Kb) 用BamH1和Sac1切两刀(应该会得到12Kb和约2Kb的GUS片段)
但是一连切了不下十次...
得到的结果都是明显可见2K的GUS片段，但是我要的12KbVector呈现短短的smear
smear现象肉眼判断是从原本的13Kb到我要的12Kb停止
是否
1.其中之一酵素失活(但又可以看到GUS片段??)
2.plamid问题，是否纯化过程中残留过多的RNA或杂质影响
3.condition: H2O 6
10XBSA 2
buffer1 2 (BamH175% Sac1100%)
DNA 8
enzyme BamH1 1
Sac1 1 (ul)
37度 water bath 3 hours
请达人们帮我看看哪里出了问题
感恩
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1F：推 ebiyaya:这可能要看图才知道 我印象中BamH1和Sac1是不推荐一起切的 07/26 00:31
2F：→ ebiyaya:smear的现象是否是因为DNA量太多造成拖尾巴的现象 07/26 00:33
3F：推 ebiyaya:NEB buffer中 BamH1和Sac1是推荐分开切效率较好 07/26 00:36