※ 引述《huangsw (Orz)》之銘言： : ※ 引述《mikoyan (mikoyan)》之銘言ꄊ: 1. : 30-40 cycle才過Ct : 代表你的sample 是low copy number : 簡單的說 target DNA濃度不高 : 所以primer 沒有很快的 進行PCR cycle 大量複製出DNA : 想要快速達到Ct值可以試著增加DNA濃度 : 舉例來說 mtDNA為檢體時 : 螢光訊號很快就可以超越Ct... : 因為mtDNA有母系遺傳 以及HIGH copy number的特性 : 2. : 我知道的SYBR... 裡面沒有Quencher dye耶... : 會用到Quencher-Repoter dye probe的是 Taqman SNP assay 我們用的是 Master Mix (我在 ABI 的網站上沒有看到這一項商品) 助教解釋裡面有 SYBR I Green, buffer, Taq, nucleic acid 我對照助教提供的成分和 ABI 公佈的商品細項 我覺得 Master Mix 比較像是 ABI 上賣的 TaqMAN kit.. o.Oa 我個人猜想應該是有使用 Quencher-Reporter Dye Probes 只是助教沒有詳細說明使用材料 不然這就和我先前所讀的原理不一樣了 呵呵～ : 我知道 Ct 界線下 會有螢光沒錯... : 但是那只是因為前十幾次PCR產生短片段雙股DNA所出現的螢光訊號 : 要到十幾個Cycle後(前面先複製了一堆template) : 每次PCR產物皆以 log 方式增加 : 螢光才會跟著上升 越過Ct..... : 當你的DNA濃度低 所含的Target DNA也比較少 : 所以需要比較多的Cycle才可以讓複製呈現 log 方式上升 那些 Ct 以下的訊號 有些會成為以 Log 倍數成長代表性訊號 我想這些訊號是我們要的.... 而那些不會有 Ct, 不有後續 Log 成長的訊號呢 ? 我感覺這樣的訊號挺多的耶.... 這些訊號是不是反應中產生過多的 templates 而其中只有幾個 templates 才會接續 replication, 才有機會可以 Log 成長 而那些沒被選中的, 就是那些雜訊呢 ? : 我在1.已經有說建議的方法 當然 不只那個方法啦...... : 以上是我對Real-time的了解.... 我實習的設備也是 ABI 7900HT ~ 這是我第一次做的 Real-Tiem PCR ! 多謝您的指導......... Orz --

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