※ 引述《huangsw (Orz)》之铭言： : ※ 引述《mikoyan (mikoyan)》之铭言ꄊ: 1. : 30-40 cycle才过Ct : 代表你的sample 是low copy number : 简单的说 target DNA浓度不高 : 所以primer 没有很快的 进行PCR cycle 大量复制出DNA : 想要快速达到Ct值可以试着增加DNA浓度 : 举例来说 mtDNA为检体时 : 萤光讯号很快就可以超越Ct... : 因为mtDNA有母系遗传 以及HIGH copy number的特性 : 2. : 我知道的SYBR... 里面没有Quencher dye耶... : 会用到Quencher-Repoter dye probe的是 Taqman SNP assay 我们用的是 Master Mix (我在 ABI 的网站上没有看到这一项商品) 助教解释里面有 SYBR I Green, buffer, Taq, nucleic acid 我对照助教提供的成分和 ABI 公布的商品细项 我觉得 Master Mix 比较像是 ABI 上卖的 TaqMAN kit.. o.Oa 我个人猜想应该是有使用 Quencher-Reporter Dye Probes 只是助教没有详细说明使用材料 不然这就和我先前所读的原理不一样了 呵呵～ : 我知道 Ct 界线下 会有萤光没错... : 但是那只是因为前十几次PCR产生短片段双股DNA所出现的萤光讯号 : 要到十几个Cycle後(前面先复制了一堆template) : 每次PCR产物皆以 log 方式增加 : 萤光才会跟着上升 越过Ct..... : 当你的DNA浓度低 所含的Target DNA也比较少 : 所以需要比较多的Cycle才可以让复制呈现 log 方式上升 那些 Ct 以下的讯号 有些会成为以 Log 倍数成长代表性讯号 我想这些讯号是我们要的.... 而那些不会有 Ct, 不有後续 Log 成长的讯号呢 ? 我感觉这样的讯号挺多的耶.... 这些讯号是不是反应中产生过多的 templates 而其中只有几个 templates 才会接续 replication, 才有机会可以 Log 成长 而那些没被选中的, 就是那些杂讯呢 ? : 我在1.已经有说建议的方法 当然 不只那个方法啦...... : 以上是我对Real-time的了解.... 我实习的设备也是 ABI 7900HT ~ 这是我第一次做的 Real-Tiem PCR ! 多谢您的指导......... Orz --

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