作者ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)
看板Biotech
標題Re: protein無法induce
時間Sat Aug 5 01:47:22 2006
※ 引述《[email protected] (加油加油！！)》之銘言：
: 我使用pGEX-KG來產GST fusion protein
: sequence出來的結果是正確的
: 但是在SDS-PAGE上沒有IPTG induction的痕跡
: 不死心的用western blotting check
: 可以偵測到GST和我的protein的signal
: 有沒有人知道為什麼
: 要怎麼解決?
: 拜託知道的人解答一下 感激不盡!!
借標題用一下
想問一下版上的高手們
大家如果用pGEX系統做蛋白表現時
會用 bead 還是 column 純化呢?
(ex:Glutathione sepharose 4B vs GSTrap FF)
又，如果要去掉fusion上的GST
假如用thrombin切除後，會再利用什麼方式針對target protein做分離?
(gel filtration column? Benzamidine column? or...some else?)
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自己亂玩GST alone，可以收到一大堆，有種想自己打anti-GST Ab的念頭 /_\
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.162.82.116
1F：→ Helene:可能要看你starting material的體積吧 08/05 02:01
2F：→ Helene:我之前thrombin切完沒有再純化.... 因為assay不需要 08/05 02:02
3F：→ ROKEE:那多出來的Ser proteinase會有影響嗎?@_@ 08/05 02:23
4F：推 Helene:看你是要做什麼assay 08/05 02:39