作者ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)
看板Biotech
标题Re: protein无法induce
时间Sat Aug 5 01:47:22 2006
※ 引述《[email protected] (加油加油！！)》之铭言：
: 我使用pGEX-KG来产GST fusion protein
: sequence出来的结果是正确的
: 但是在SDS-PAGE上没有IPTG induction的痕迹
: 不死心的用western blotting check
: 可以侦测到GST和我的protein的signal
: 有没有人知道为什麽
: 要怎麽解决?
: 拜托知道的人解答一下 感激不尽!!
借标题用一下
想问一下版上的高手们
大家如果用pGEX系统做蛋白表现时
会用 bead 还是 column 纯化呢?
(ex:Glutathione sepharose 4B vs GSTrap FF)
又，如果要去掉fusion上的GST
假如用thrombin切除後，会再利用什麽方式针对target protein做分离?
(gel filtration column? Benzamidine column? or...some else?)
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自己乱玩GST alone，可以收到一大堆，有种想自己打anti-GST Ab的念头 /_\
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 218.162.82.116
1F：→ Helene:可能要看你starting material的体积吧 08/05 02:01
2F：→ Helene:我之前thrombin切完没有再纯化.... 因为assay不需要 08/05 02:02
3F：→ ROKEE:那多出来的Ser proteinase会有影响吗?@_@ 08/05 02:23
4F：推 Helene:看你是要做什麽assay 08/05 02:39