作者NightAmades (夜)
看板Biotech
標題Re: [問題] silver stain 染不上去....
時間Thu Aug 24 17:21:47 2006
※ 引述《NightAmades (夜)》之銘言：
: 請問有沒有人遇到過silever stain染不上去的經驗?
: 我這幾次染都染不上去!
: 而所謂染不上去是連background都沒有顏色...
: 就是仍然是gel的透明顏色....= =
: 基本上...應該在步驟上沒有問題才對...
: 因為其他人先前一樣照做可以染....
: 請問有沒有人有遇到類似甚至跟我ㄧ樣的問題?
: 希望有高手可以解惑 >"<
: (因為現在手上沒有protocol...若需要的話我會再PO!)
我來補一下protocol...
1. Fix 50% MeOH, 12% AcOH add 0.154ml 24% H2CO/200mL in hood
incubate for more than 1 hour to overnight
2. Wash 50% MeOH Wash 3X 20 minutes
3. Pretreat 0.02% Na2S2O3 thiosulfate solutions should be prepared
fresh, save some for step 7.
Incubate 1 minute exactly.
4.Rinse ddH2O 3 times 20 seconds
5. Impregnate 0.2% AgNO3 Dilute 2 ml of 20% stock to 200ml, and add
0.231ml 24% H2CO
Incubate for 20 minutes, DON'T TOUCH GEL!!
6. Rinse ddH2O 2 times 30 seconds
7. Develop 6% Na2CO3 (200ml) add 0.154 ml 24% H2CO and 4 ml of
0.02% Na2S2O3
Incubate for 10 minutes
因為我的問題是染不上去，所以我只有PO到development的步驟!
希望有高手或是有經驗的大大解惑 >"<
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.127.160.142
1F：推 CErline:是我眼睛不好嗎？你的formadehyde倒底加在那一步？ 08/24 19:29
2F：推 CErline:抱歉，看到了，因為有時候formadehyde放太久會失去還原力 08/24 19:44
3F：推 CErline:step5好像怪怪的，AgNO3好稀喔…你怎麼配的呢？ 08/24 19:51
4F：→ NightAmades:我的是 20%硝酸銀2ml dilute到200ml-> 0.2% 08/24 20:10
5F：→ NightAmades:意思是硝酸銀太稀了嗎? 實驗室之前有人用同樣濃度去做 08/24 20:11
6F：→ NightAmades:也染的出來說...>"< 通常大家都用多少%的呢? 08/24 20:12
7F：推 CErline:0.2%很ok啊，連marker也染不出來嗎？ 08/27 23:49
8F：推 NightAmades:是阿...marker都染不出來..整片gel一片透明... 08/28 02:23