作者NightAmades (夜)
看板Biotech
标题Re: [问题] silver stain 染不上去....
时间Thu Aug 24 17:21:47 2006
※ 引述《NightAmades (夜)》之铭言：
: 请问有没有人遇到过silever stain染不上去的经验?
: 我这几次染都染不上去!
: 而所谓染不上去是连background都没有颜色...
: 就是仍然是gel的透明颜色....= =
: 基本上...应该在步骤上没有问题才对...
: 因为其他人先前一样照做可以染....
: 请问有没有人有遇到类似甚至跟我ㄧ样的问题?
: 希望有高手可以解惑 >"<
: (因为现在手上没有protocol...若需要的话我会再PO!)
我来补一下protocol...
1. Fix 50% MeOH, 12% AcOH add 0.154ml 24% H2CO/200mL in hood
incubate for more than 1 hour to overnight
2. Wash 50% MeOH Wash 3X 20 minutes
3. Pretreat 0.02% Na2S2O3 thiosulfate solutions should be prepared
fresh, save some for step 7.
Incubate 1 minute exactly.
4.Rinse ddH2O 3 times 20 seconds
5. Impregnate 0.2% AgNO3 Dilute 2 ml of 20% stock to 200ml, and add
0.231ml 24% H2CO
Incubate for 20 minutes, DON'T TOUCH GEL!!
6. Rinse ddH2O 2 times 30 seconds
7. Develop 6% Na2CO3 (200ml) add 0.154 ml 24% H2CO and 4 ml of
0.02% Na2S2O3
Incubate for 10 minutes
因为我的问题是染不上去，所以我只有PO到development的步骤!
希望有高手或是有经验的大大解惑 >"<
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.127.160.142
1F：推 CErline:是我眼睛不好吗？你的formadehyde倒底加在那一步？ 08/24 19:29
2F：推 CErline:抱歉，看到了，因为有时候formadehyde放太久会失去还原力 08/24 19:44
3F：推 CErline:step5好像怪怪的，AgNO3好稀喔…你怎麽配的呢？ 08/24 19:51
4F：→ NightAmades:我的是 20%硝酸银2ml dilute到200ml-> 0.2% 08/24 20:10
5F：→ NightAmades:意思是硝酸银太稀了吗? 实验室之前有人用同样浓度去做 08/24 20:11
6F：→ NightAmades:也染的出来说...>"< 通常大家都用多少%的呢? 08/24 20:12
7F：推 CErline:0.2%很ok啊，连marker也染不出来吗？ 08/27 23:49
8F：推 NightAmades:是阿...marker都染不出来..整片gel一片透明... 08/28 02:23