作者colosseo (colosseo)
看板Biotech
標題[請教]檢測膽酸的方法，藥品配製問題
時間Mon Sep 18 15:22:21 2006
大家好，以下是我參考文獻上的檢測方法，有些藥品配製問題，
可否請有經驗者幫忙回答一下，感激不盡阿！
Bile acid檢測（Turley and Dietschy, 1978）
A.Reaction mixture:
750μl Tris-HCl buffer: (0.133M Tris, 0.666mM EDTA, pH=9.5)
500μl 1M hydrazine hydrate (pH=9.5)
150μl 7mM NAD+ (sodium bicarbonate, pH=7.0)
B. Sample or standard(<1.5 μmol): dissolved in methanol
C. Enzyme:
Hydroxysteroid dehydrogenase (HSD):
with cold Tris-HCl buffer (0.03M Tris, 1mM EDTA, pH=7.2)
Method:
Reagent A + 50μl sample + 100μl Reagent C
-->30℃ 60min--> 終止反應？-->340nm測吸光值
問題：
1.Tris-HCl buffer是將Tris和EDTA粉末溶於去離子水，然後以HCl調pH嗎？
Tris有限制買哪種的嗎？
2.hydrazine hydrate買來是液體狀標示98%，請問如何配成1M，
以及用什麼溶液去調濃度？去離子水嗎？
3.7mM NAD+買來是粉末狀，是用去離子水配嗎？該怎麼配成7mM？
另外需要以sodium bicarbonate來調pH至7.0，是要用多少濃度的sodium bicarbonate
來調？還是直接加sodium bicarbonate粉末進去調？
4.不知道要加多少的酵素粉末去配製酵素溶液
5.以上藥品配製有啥小技巧或是要注意的地方嗎？
6.反應過後需要用高溫去活化嗎？
不好意思，因為完全沒有做過，問了一堆看起來似乎是很基本的問題
煩請各位幫忙一下，如果有詳細配方更好，非常感謝！
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.98.238
1F：推 transmore:Tris-HCl 就是Tris用HCl調pH 沒有EDTA 09/18 22:08
2F：→ gogomeou:我以為Tris-HCl就是用Tris-HCl powder泡的buffer呢 09/18 22:29