作者colosseo (colosseo)
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标题[请教]检测胆酸的方法，药品配制问题
时间Mon Sep 18 15:22:21 2006
大家好，以下是我参考文献上的检测方法，有些药品配制问题，
可否请有经验者帮忙回答一下，感激不尽阿！
Bile acid检测（Turley and Dietschy, 1978）
A.Reaction mixture:
750μl Tris-HCl buffer: (0.133M Tris, 0.666mM EDTA, pH=9.5)
500μl 1M hydrazine hydrate (pH=9.5)
150μl 7mM NAD+ (sodium bicarbonate, pH=7.0)
B. Sample or standard(<1.5 μmol): dissolved in methanol
C. Enzyme:
Hydroxysteroid dehydrogenase (HSD):
with cold Tris-HCl buffer (0.03M Tris, 1mM EDTA, pH=7.2)
Method:
Reagent A + 50μl sample + 100μl Reagent C
-->30℃ 60min--> 终止反应？-->340nm测吸光值
问题：
1.Tris-HCl buffer是将Tris和EDTA粉末溶於去离子水，然後以HCl调pH吗？
Tris有限制买哪种的吗？
2.hydrazine hydrate买来是液体状标示98%，请问如何配成1M，
以及用什麽溶液去调浓度？去离子水吗？
3.7mM NAD+买来是粉末状，是用去离子水配吗？该怎麽配成7mM？
另外需要以sodium bicarbonate来调pH至7.0，是要用多少浓度的sodium bicarbonate
来调？还是直接加sodium bicarbonate粉末进去调？
4.不知道要加多少的酵素粉末去配制酵素溶液
5.以上药品配制有啥小技巧或是要注意的地方吗？
6.反应过後需要用高温去活化吗？
不好意思，因为完全没有做过，问了一堆看起来似乎是很基本的问题
烦请各位帮忙一下，如果有详细配方更好，非常感谢！
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◆ From: 140.112.98.238
1F：推 transmore:Tris-HCl 就是Tris用HCl调pH 没有EDTA 09/18 22:08
2F：→ gogomeou:我以为Tris-HCl就是用Tris-HCl powder泡的buffer呢 09/18 22:29