作者minervann (wind)
看板Biotech
標題[問題] western blotting
時間Fri Sep 22 08:54:46 2006
最近一直在做western
但一直無法找到我要的蛋白
每次顯影出來都是非常空白的一張底片
我要找的蛋白是p*-Akt
我不知道在哪個步驟錯了
希望版上的各位大大能幫我找出問題所在
以下是我做western 較關鍵的步驟
blocking buffer是5%的脫脂奶粉 作用1小時
一抗是用TBST配(1:1000) overnight 4度
二抗是用TBST+2.5%的脫脂奶粉配置而成 作用2小時
washing buffer是TBST
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.65.50
1F：推 havenn:sample? 09/22 09:00
2F：推 cestbien:positive control ? 09/22 09:03
3F：推 minervann:sample是人類T細胞,沒有做任何處理,單純測細胞內的p*-Ak 09/22 13:07
4F：→ minervann:P*-Akt表現 09/22 13:08
5F：推 aggaci:有沒加phosphotase inhibitor? 09/22 19:42
6F：推 minervann:有加phosphotase inhibitor 09/24 13:09