作者minervann (wind)
看板Biotech
标题[问题] western blotting
时间Fri Sep 22 08:54:46 2006
最近一直在做western
但一直无法找到我要的蛋白
每次显影出来都是非常空白的一张底片
我要找的蛋白是p*-Akt
我不知道在哪个步骤错了
希望版上的各位大大能帮我找出问题所在
以下是我做western 较关键的步骤
blocking buffer是5%的脱脂奶粉 作用1小时
一抗是用TBST配(1:1000) overnight 4度
二抗是用TBST+2.5%的脱脂奶粉配置而成 作用2小时
washing buffer是TBST
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.65.50
1F：推 havenn:sample? 09/22 09:00
2F：推 cestbien:positive control ? 09/22 09:03
3F：推 minervann:sample是人类T细胞,没有做任何处理,单纯测细胞内的p*-Ak 09/22 13:07
4F：→ minervann:P*-Akt表现 09/22 13:08
5F：推 aggaci:有没加phosphotase inhibitor? 09/22 19:42
6F：推 minervann:有加phosphotase inhibitor 09/24 13:09