※ 引述《lakerjackt (N￾N )》之銘言： : ※ [本文轉錄自 Biology 看板] : 作者: lakerjackt (N￾N ) 看板: Biology : 標題: 從cell上抽出的RNA : 時間: Thu Sep 21 02:18:30 2006 : 最近從cell上把RNA下來...也轉了cDNA : 然後有用一段primer當internal control去夾看看有沒有轉成功 : 發現是有的!! : 但卻可以發現跑完DNA膠後,照出的圖中,每一個well最上面 : 位置大約在load well的孔下面一點點皆有一條細細亮亮的band : 我學長說是chromosome,那這對cDNA後續要做的實驗會有影響嗎? : 因為我的問題來了...就是後來我把cDNA去夾兩段片段..都沒東西 : 然後我又用gradient方式重找annealing溫度還是全沒有東西.. : 這時我想會部會我的cDNA..被分解了!!!..但這可能性因不高.. : 後來想會不會是PCR儀器有問題..我家是用PDA的PCR儀器.. : 聽說這種跑起來很差..請問有跑過的人,,,對這種儀器有哪些該注意的?? : 或到底好不好用?? : 到底需不需要找廠商來校正... : 謝謝 請直接拿RNA去做PCR,這樣可以確定你跑出來的PCR product是來自RNA, 還是cDNA,如果PCR出來有東西那就代表你的RNA被genomice DNA contaminate了, 這樣最好是重新處理你的RNA sample,比方說用RNase-free DNase切一下, 不過要是你的primer anneal到的位置是在不同的exon上,那有genomic DNA的污染也沒差 你之前的PCR有成功就表示機器沒問題,是否要考慮一下PCR的primer設計, 如果你要amplify的東西是非常非常少的,那只靠一次PCR是很容易沒有products, 所以有兩個方法,請你先去查一下,你的target gene會在哪些細胞裡大量表現, 如果你抽RNA的細胞裡表現量不高,那建議還是找其他的細胞或是組織來抽, 另外就是設計nested PCR來做amplification, 用兩對primer做兩次PCR --

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