※ 引述《lakerjackt (N￾N )》之铭言： : ※ [本文转录自 Biology 看板] : 作者: lakerjackt (N￾N ) 看板: Biology : 标题: 从cell上抽出的RNA : 时间: Thu Sep 21 02:18:30 2006 : 最近从cell上把RNA下来...也转了cDNA : 然後有用一段primer当internal control去夹看看有没有转成功 : 发现是有的!! : 但却可以发现跑完DNA胶後,照出的图中,每一个well最上面 : 位置大约在load well的孔下面一点点皆有一条细细亮亮的band : 我学长说是chromosome,那这对cDNA後续要做的实验会有影响吗? : 因为我的问题来了...就是後来我把cDNA去夹两段片段..都没东西 : 然後我又用gradient方式重找annealing温度还是全没有东西.. : 这时我想会部会我的cDNA..被分解了!!!..但这可能性因不高.. : 後来想会不会是PCR仪器有问题..我家是用PDA的PCR仪器.. : 听说这种跑起来很差..请问有跑过的人,,,对这种仪器有哪些该注意的?? : 或到底好不好用?? : 到底需不需要找厂商来校正... : 谢谢 请直接拿RNA去做PCR,这样可以确定你跑出来的PCR product是来自RNA, 还是cDNA,如果PCR出来有东西那就代表你的RNA被genomice DNA contaminate了, 这样最好是重新处理你的RNA sample,比方说用RNase-free DNase切一下, 不过要是你的primer anneal到的位置是在不同的exon上,那有genomic DNA的污染也没差 你之前的PCR有成功就表示机器没问题,是否要考虑一下PCR的primer设计, 如果你要amplify的东西是非常非常少的,那只靠一次PCR是很容易没有products, 所以有两个方法,请你先去查一下,你的target gene会在哪些细胞里大量表现, 如果你抽RNA的细胞里表现量不高,那建议还是找其他的细胞或是组织来抽, 另外就是设计nested PCR来做amplification, 用两对primer做两次PCR --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.40.41