※ 引述《[email protected] (可愛女孩)》之銘言： : ※ 引述《[email protected] (jolly)》之銘言： : : 在下最近進行westerm的實驗 : : 想要看的蛋白是cytochrome c (15kDA) : : 算是小分子的物質 : : 因此就製作15% GEL進行實驗 : : 可是最後壓片出來的Band很粗 不是細細的一條 : : 而將同樣15%gel去看 actin(43kDA)結果的BAND 就是細的一條 : : 撇除cytochrome c量表現很多 因為跑12.5% Gel時 band就不會很粗 : : 請問各位也有這樣情況嗎 或是這是要怎麼解釋啊 : : 感恩 : 這跟gel的%有關係 當跑15%的時候 小分子區域的位置就會被拉開 : 因此就會造成Band 很粗 : 而大分子區域沒辦法將距離拉這麼大 : 所以會被壓縮成一條細細的band : 不過我比較想問W大 transfer的condition : 因為我最近也要壓小分子蛋白 但是壓不出來 : 可以請問一下 transfer buffer的配方 跟transfer時的condition 嗎 : 謝謝^^ 首先 謝謝你的解答 我用的 Transfer buffer: 10X Tris-Glycine (0.25M Tris base : 3.03g + 2M Glycine : 15.01g /100 ml)→100ml ddH2O→700ml Absolute methanol→200ml Adjust pH to 8~8.3 Keep at 4oC before use Transfer 定電壓 30V overnight 電流約90mA 可是說實在的 因為BAND有點粗 並且每各WELL的BAND沒有一樣粗 壓片結果表現明顯的BAND又黑又粗 不明顯的就較淡也較細 老闆不滿意 覺得不漂亮 所以後來 我又換回12.5%GEL 而另外學弟 舉一反三 配製了13.5%GEL 想說解決12.5%GEL 擔心小分子的跳海 15%GEL BAND的不漂亮 結果還不錯 你可以試試 以上是我的經驗 希望對你有幫助 等你進行完了之後 可以分享你的感覺嗎 讓我參考一下 感恩 --

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