※ 引述《[email protected] (可爱女孩)》之铭言： : ※ 引述《[email protected] (jolly)》之铭言： : : 在下最近进行westerm的实验 : : 想要看的蛋白是cytochrome c (15kDA) : : 算是小分子的物质 : : 因此就制作15% GEL进行实验 : : 可是最後压片出来的Band很粗 不是细细的一条 : : 而将同样15%gel去看 actin(43kDA)结果的BAND 就是细的一条 : : 撇除cytochrome c量表现很多 因为跑12.5% Gel时 band就不会很粗 : : 请问各位也有这样情况吗 或是这是要怎麽解释啊 : : 感恩 : 这跟gel的%有关系 当跑15%的时候 小分子区域的位置就会被拉开 : 因此就会造成Band 很粗 : 而大分子区域没办法将距离拉这麽大 : 所以会被压缩成一条细细的band : 不过我比较想问W大 transfer的condition : 因为我最近也要压小分子蛋白 但是压不出来 : 可以请问一下 transfer buffer的配方 跟transfer时的condition 吗 : 谢谢^^ 首先 谢谢你的解答 我用的 Transfer buffer: 10X Tris-Glycine (0.25M Tris base : 3.03g + 2M Glycine : 15.01g /100 ml)→100ml ddH2O→700ml Absolute methanol→200ml Adjust pH to 8~8.3 Keep at 4oC before use Transfer 定电压 30V overnight 电流约90mA 可是说实在的 因为BAND有点粗 并且每各WELL的BAND没有一样粗 压片结果表现明显的BAND又黑又粗 不明显的就较淡也较细 老板不满意 觉得不漂亮 所以後来 我又换回12.5%GEL 而另外学弟 举一反三 配制了13.5%GEL 想说解决12.5%GEL 担心小分子的跳海 15%GEL BAND的不漂亮 结果还不错 你可以试试 以上是我的经验 希望对你有帮助 等你进行完了之後 可以分享你的感觉吗 让我参考一下 感恩 --

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