作者licary (看不見的真實)
看板Biotech
標題[問題] western blotting壓片時的問題
時間Thu Sep 28 20:36:51 2006
最近 壓片的時候發現 壓出來的 常是空白片
原本以為真的是空白的
但是 後來才發現 原來是ECL加進去後 decay太快
所以 每次在ECL作用後 在暗房 可以看到membrane上該有的位置
有很亮的光
但是 當我把底片拿出來後 就可以看到 那個"光"
很快的就消失了 = =" 然後 就壓不出東西了
如果動作再快一點 其實 是可以壓出很黑的band
但 是 儘管我的動作再快 壓完一張 就沒法壓第二張了
所以 就得再重加ECL....
原本以為是ECL有問題 但 買了新的 還是同樣的情形
用不同的一抗 也一樣
會是二抗嗎？ (好像也有換過 我明天再確定看看)
因為這個星期 所有的結果都是這樣 > <" (之前不會這樣)
還是wash buffer有問題呢
請問 有人有好的建議 或覺得是那個步驟出了問題呢
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.104.78.194
1F：推 alaric:ECL你是用哪家的? 09/28 22:45
2F：→ alaric:我的, 都還可以O/N再壓, 當然時間要拉長些.. 09/28 22:46
3F：推 mandible:ECL有問題吧!建議用PIERCE或是AMERSHAME或是MILLIPORE 09/28 23:05
4F：推 linker0726:二抗濃度會不會太高? 1:2500? 1:5000? 09/28 23:35
5F：推 jsi:有可能是二抗太濃 09/29 00:22
6F：推 threestars:不要用Santa Cruz ECL 壓一次壓不了第二次 09/29 01:51
7F：推 u8524009:我也建議不要用Santa Cruz的ECL....decay超快的.. 09/29 16:08
8F：→ u8524009:雖然比較便宜.不過真的很爛..建議用騰達行的PIERCE 的ECL 09/29 16:09
9F：推 licary:我用的是伯森的 09/30 00:15
10F：→ licary:二抗的話 從1:2000~1:4000都有試過 情況好像一樣 09/30 00:15
11F：推 threestars:伯森ECL 算很好了 應該有一小時以上 10/01 15:40