作者licary (看不见的真实)
看板Biotech
标题[问题] western blotting压片时的问题
时间Thu Sep 28 20:36:51 2006
最近 压片的时候发现 压出来的 常是空白片
原本以为真的是空白的
但是 後来才发现 原来是ECL加进去後 decay太快
所以 每次在ECL作用後 在暗房 可以看到membrane上该有的位置
有很亮的光
但是 当我把底片拿出来後 就可以看到 那个"光"
很快的就消失了 = =" 然後 就压不出东西了
如果动作再快一点 其实 是可以压出很黑的band
但 是 尽管我的动作再快 压完一张 就没法压第二张了
所以 就得再重加ECL....
原本以为是ECL有问题 但 买了新的 还是同样的情形
用不同的一抗 也一样
会是二抗吗？ (好像也有换过 我明天再确定看看)
因为这个星期 所有的结果都是这样 > <" (之前不会这样)
还是wash buffer有问题呢
请问 有人有好的建议 或觉得是那个步骤出了问题呢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.104.78.194
1F：推 alaric:ECL你是用哪家的? 09/28 22:45
2F：→ alaric:我的, 都还可以O/N再压, 当然时间要拉长些.. 09/28 22:46
3F：推 mandible:ECL有问题吧!建议用PIERCE或是AMERSHAME或是MILLIPORE 09/28 23:05
4F：推 linker0726:二抗浓度会不会太高? 1:2500? 1:5000? 09/28 23:35
5F：推 jsi:有可能是二抗太浓 09/29 00:22
6F：推 threestars:不要用Santa Cruz ECL 压一次压不了第二次 09/29 01:51
7F：推 u8524009:我也建议不要用Santa Cruz的ECL....decay超快的.. 09/29 16:08
8F：→ u8524009:虽然比较便宜.不过真的很烂..建议用腾达行的PIERCE 的ECL 09/29 16:09
9F：推 licary:我用的是伯森的 09/30 00:15
10F：→ licary:二抗的话 从1:2000~1:4000都有试过 情况好像一样 09/30 00:15
11F：推 threestars:伯森ECL 算很好了 应该有一小时以上 10/01 15:40