作者jgoing (jgoing說)
看板Biotech
標題Re: [問題] western blotting壓片時的問題
時間Sun Oct 1 02:38:50 2006
你的狀況絕對不需要更靈敏的ECL
貴且無法解決問題
誠如linker072與jsi兩位所言
你的二抗濃度太高是造成訊號很快消失的主因
建議你做到1:10000應該都沒有問題喔
是用NEL105的話
很多人都覺得抗體下太少而心有不安
其實這種想法是很有趣的^^
※ 引述《licary (看不見的真實)》之銘言：
: 最近 壓片的時候發現 壓出來的 常是空白片
: 原本以為真的是空白的
: 但是 後來才發現 原來是ECL加進去後 decay太快
: 所以 每次在ECL作用後 在暗房 可以看到membrane上該有的位置
: 有很亮的光
: 但是 當我把底片拿出來後 就可以看到 那個"光"
: 很快的就消失了 = =" 然後 就壓不出東西了
: 如果動作再快一點 其實 是可以壓出很黑的band
: 但 是 儘管我的動作再快 壓完一張 就沒法壓第二張了
: 所以 就得再重加ECL....
: 原本以為是ECL有問題 但 買了新的 還是同樣的情形
: 用不同的一抗 也一樣
: 會是二抗嗎？ (好像也有換過 我明天再確定看看)
: 因為這個星期 所有的結果都是這樣 > <" (之前不會這樣)
: 還是wash buffer有問題呢
: 請問 有人有好的建議 或覺得是那個步驟出了問題呢
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◆ From: 219.84.131.203
1F：推 antia:原來是這樣阿，我家老闆都說是protein沒收好 10/01 08:52
2F：推 licary:嗯 謝謝 我試試看 :) 10/01 08:55
3F：推 cloud74115:membrane 上有咖啡色一塊嗎???訊號可能太強了 10/01 14:25
4F：推 mandible:為何不先與別家借ECL試試看!你的二抗已經濃度很高了! 10/01 20:07
5F：→ mandible:這是我的感覺.Decay太快不太可能是二抗的關係! 10/01 20:08
6F：推 jgoing:二抗與ECL的關係是酵素反應，二抗太濃當然會影響反應的時間 10/04 00:24