作者jgoing (jgoing说)
看板Biotech
标题Re: [问题] western blotting压片时的问题
时间Sun Oct 1 02:38:50 2006
你的状况绝对不需要更灵敏的ECL
贵且无法解决问题
诚如linker072与jsi两位所言
你的二抗浓度太高是造成讯号很快消失的主因
建议你做到1:10000应该都没有问题喔
是用NEL105的话
很多人都觉得抗体下太少而心有不安
其实这种想法是很有趣的^^
※ 引述《licary (看不见的真实)》之铭言：
: 最近 压片的时候发现 压出来的 常是空白片
: 原本以为真的是空白的
: 但是 後来才发现 原来是ECL加进去後 decay太快
: 所以 每次在ECL作用後 在暗房 可以看到membrane上该有的位置
: 有很亮的光
: 但是 当我把底片拿出来後 就可以看到 那个"光"
: 很快的就消失了 = =" 然後 就压不出东西了
: 如果动作再快一点 其实 是可以压出很黑的band
: 但 是 尽管我的动作再快 压完一张 就没法压第二张了
: 所以 就得再重加ECL....
: 原本以为是ECL有问题 但 买了新的 还是同样的情形
: 用不同的一抗 也一样
: 会是二抗吗？ (好像也有换过 我明天再确定看看)
: 因为这个星期 所有的结果都是这样 > <" (之前不会这样)
: 还是wash buffer有问题呢
: 请问 有人有好的建议 或觉得是那个步骤出了问题呢
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◆ From: 219.84.131.203
1F：推 antia:原来是这样阿，我家老板都说是protein没收好 10/01 08:52
2F：推 licary:嗯 谢谢 我试试看 :) 10/01 08:55
3F：推 cloud74115:membrane 上有咖啡色一块吗???讯号可能太强了 10/01 14:25
4F：推 mandible:为何不先与别家借ECL试试看!你的二抗已经浓度很高了! 10/01 20:07
5F：→ mandible:这是我的感觉.Decay太快不太可能是二抗的关系! 10/01 20:08
6F：推 jgoing:二抗与ECL的关系是酵素反应，二抗太浓当然会影响反应的时间 10/04 00:24