作者Mouseking (叫我老鼠王....-_-)
看板Biotech
標題Re: [問題] 門外漢請教PCR
時間Thu Nov 2 03:08:30 2006
※ 引述《rickyjung ()》之銘言：
: 由於通識課的需求，做了一個有關PCR的實驗，還跑了電泳，但實在是無法看懂結果
: 想請知道的人以最淺白的方式描述，謝謝。
: 有關內容:細胞溶解->加入核醣核酸(酉每)->蛋白質沉澱->DNA沉澱->DNA水和作用
: 以成品跑PCR。
: 結果:http://photo.xuite.net/rickyjung235/1228263/1.jpg
你這不是簡單的PCR啦，這叫做ChromatinIP(簡稱CHIP)
目的在研究蛋白質（應該是某個transcription factor）bind在DNA
的位置分析（通常是某個gene的promoter），ㄟ害......怎現在通識課
上這個？你是哪門課啊？嚇死人了..........
細胞溶解使染色體外露......此時蛋白質bind在DNA上的作用位置（通常有特定序列）
因為染色體很長和蛋白質纏在一起.....所以先用西每切成小片段....
之後加入你要研究的蛋白質抗體.....使抗體和蛋白質結合.....
在用immunoprecipatate方式沈澱蛋白質.....此時核酸還是黏在蛋白質上喔
之後將其中的核酸溶解進行PCR的實驗.....就可以知道這蛋白質是不是真的
bind在某片段DNA上....好奇的是......你的PCR product竟然有1kb多
通常不會設計這麼長啦......如果你要定量做Real time PCR.......好怪喔
希望這樣解釋你會懂......
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.58.54.177
1F：推 milkriver:現在的通識課真不得了... 11/02 10:37
2F：推 blence:我很好奇,從上面的文字圖片就斷定是CHIP,會不會想太多？ 11/02 18:05
3F：→ blence:如果把上面敘述想成從E coli純化plasmid，利用viogene或123 11/02 18:07
4F：→ blence:solution的方法，是不是也很像呢？ 11/02 18:09
5F：→ blence:而且核糖核酸脢RNase的使用在CHIP的實驗並不容易用到吧 11/02 18:11
6F：推 Bluecold:推樓上 這樣可以看出是CHIP 我想問怎麼知道的? 11/02 19:40
7F：推 ssuny:這圖怎麼看出是CHIP呢??? 我覺得很單純的是PCR的電泳圖阿XDD 11/02 23:47
8F：推 haveacat:推樓上 :D 11/06 13:10
9F：推 SPEman:整個碩士班念完都沒做過CHIP,通識課會有?? 是PCR吧 11/08 00:15