作者Mouseking (叫我老鼠王....-_-)
看板Biotech
标题Re: [问题] 门外汉请教PCR
时间Thu Nov 2 03:08:30 2006
※ 引述《rickyjung ()》之铭言：
: 由於通识课的需求，做了一个有关PCR的实验，还跑了电泳，但实在是无法看懂结果
: 想请知道的人以最浅白的方式描述，谢谢。
: 有关内容:细胞溶解->加入核醣核酸(酉每)->蛋白质沉淀->DNA沉淀->DNA水和作用
: 以成品跑PCR。
: 结果:http://photo.xuite.net/rickyjung235/1228263/1.jpg
你这不是简单的PCR啦，这叫做ChromatinIP(简称CHIP)
目的在研究蛋白质（应该是某个transcription factor）bind在DNA
的位置分析（通常是某个gene的promoter），ㄟ害......怎现在通识课
上这个？你是哪门课啊？吓死人了..........
细胞溶解使染色体外露......此时蛋白质bind在DNA上的作用位置（通常有特定序列）
因为染色体很长和蛋白质缠在一起.....所以先用西每切成小片段....
之後加入你要研究的蛋白质抗体.....使抗体和蛋白质结合.....
在用immunoprecipatate方式沈淀蛋白质.....此时核酸还是黏在蛋白质上喔
之後将其中的核酸溶解进行PCR的实验.....就可以知道这蛋白质是不是真的
bind在某片段DNA上....好奇的是......你的PCR product竟然有1kb多
通常不会设计这麽长啦......如果你要定量做Real time PCR.......好怪喔
希望这样解释你会懂......
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 210.58.54.177
1F：推 milkriver:现在的通识课真不得了... 11/02 10:37
2F：推 blence:我很好奇,从上面的文字图片就断定是CHIP,会不会想太多？ 11/02 18:05
3F：→ blence:如果把上面叙述想成从E coli纯化plasmid，利用viogene或123 11/02 18:07
4F：→ blence:solution的方法，是不是也很像呢？ 11/02 18:09
5F：→ blence:而且核糖核酸脢RNase的使用在CHIP的实验并不容易用到吧 11/02 18:11
6F：推 Bluecold:推楼上 这样可以看出是CHIP 我想问怎麽知道的? 11/02 19:40
7F：推 ssuny:这图怎麽看出是CHIP呢??? 我觉得很单纯的是PCR的电泳图阿XDD 11/02 23:47
8F：推 haveacat:推楼上 :D 11/06 13:10
9F：推 SPEman:整个硕士班念完都没做过CHIP,通识课会有?? 是PCR吧 11/08 00:15